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| ［摘要］目的 克隆人VEGFA基因，与原核载体融合表达、纯化及其鉴定，并将其应用于肿瘤血管生长研究过程中．方法 采用 PCR 方法扩增人VEGFA序列，将其克隆入pGEX-KG原核载体， 获得pGEX-KG-hVEGFA重组质粒．将该质粒转化入E.coli菌株BL21（DE3），经IPTG诱导其表达，以GSTrap亲和层析柱纯化融合蛋白，采用SDS-PAGE电泳，Western Blot方法鉴定融合蛋白的表达．结果 PCR扩增获得了hVEGFA基因片段，经测序证实与GenBank 公布的序列一致， 重组的质粒载体经过PCR、酶切鉴定，证明重组质粒中已成功的插入了hVEGFA基因片段．成功构建了该蛋白的原核表达载体pGEX-KG-hVEGFA．结论 融合蛋白在IPTG终浓度为0.5 mmol/L 、25℃条件下诱导表达，并获得纯化融合蛋白．采用Western Blot的方法可检测到目的融合蛋白GST-hVEGFA的表达． |
| 关键词: ［关键词］VEGFA 原核载体 融合蛋白 亲和纯化 |
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