| 摘要: |
| ［摘要］目的 研究克隆肿瘤抗原人DLL4基因，与原核表达载体可溶性融合表达、分离纯化及其鉴定，并计划将其应用于DLL4特异性肺癌肿瘤疫苗研究过程中的抗血清滴度检测．方法 采用 PCR 方法扩增DLL4多核苷酸序列，克隆入pMD-18T 载体．测序正确后，将其亚克隆入pGEX-KG原核表达载体， 获得pGEX-KG-hDLL4载体．以该载体转化E.coli菌株BL21（DE3），IPTG诱导其表达，裂解大肠杆菌，以GSTrap亲和层析柱纯化目的蛋白，采用SDS-PAGE电泳，Western Blot方法鉴定目的蛋白的表达．结果 PCR扩增获得了hDLL4基因片段，经测序证实与GenBank 公布的序列一致， 重组的质粒经过PCR、酶切鉴定，证明重组质粒中已成功的插入了目的基因hDLL4．成功构建了该蛋白的原核表达载体pGEX-KG-hDLL4．结论 融合蛋白GST-hDLL4在25℃，IPTG终浓度0. 5 mmol/L 条件下诱导表达，以GSTrap亲和层析柱纯化，获得纯化融合蛋白．采用SDS-PAGE，Western Blot的方法可检测到目的可溶性融合蛋白GST-hDLL4的表达． |
| 关键词: ［关键词］DLL4 原核表达 亲和层析 融合蛋白 |
| DOI： |
| 分类号: |
| 基金项目: |
|
|
|
|
| Abstract: |
|
| Key words: |