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[摘要]目的 构建人免疫基因CD1d与绿色荧光蛋白( green fluorescent protein,GFP) 融合基因慢病毒载体并转染人胰腺癌细胞(PANC-1).方法 实时定量聚合酶链反应( RT-PCR) 方法扩增获得CD1d的全外显子片段,使之克隆到带GFP荧光报告基因慢病毒表达载体质粒中, 慢病毒包装质粒和穿梭质粒转染293T 细胞,包装成功后收集上清,浓缩,鉴定.通过慢病毒转染预实验确定MOI,进行人CD1d重组慢病毒载体转染胰腺癌PANC-1细胞株.结果 电泳鉴定结果与目的基因表达条带完全吻合,克隆测序结果与NCBI 收录的CD1d基因序列完全一致.重组慢病毒质粒可高效转染PANC-1细胞,荧光 |
关键词: [关键词]CD1d基因 GFP基因 慢病毒 转染 |
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