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[摘要]目的 研究定量PCR模板使用浓度对产物量的影响,对如何改善定量PCR技术进行一些探讨.方法 分别用1×浓度和1/10×浓度逆转录产物(cDNA)进行递增量的梯度PCR反应(0.5 μL、1 μL、2 μL、4 μL),观察其不同量之间变化的灵敏性;进一步增大样本量,来观察这两个浓度级别分辨两倍量差距(1 μL和2 μL)的能力.结果 在梯度实验中,1/10×浓度的模板表现出了明显的线性关系(R2=0.9105),即产物量随模板使用量的增加而增加,而1X浓度的模板却没有表现出来(R2=0.2488).此外,1/10×浓度的模板有效的区分出了两倍量的差距(1 μL组和2 μL组之间,t=3.329,P<0.05)而1x浓度的模板却没有.结论 进行定量PCR时,不同的模板浓度对PCR产物量有一定影响的;选择适当的模板浓度是十分必要 |
关键词: [关键词]定量PCR 琼脂糖凝胶电泳 mRNA定量 |
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